همسانه سازی نواحی جناحین در ناقل های پلاستیدی سویا

اندامک¬های پلاستیدی یکی از جایگزین¬های موثر برای تولید پروتئین¬های نوترکیب می¬باشد. تراریختی کلروپلاستی در قیاس با تراریختی هسته ای دارای برتری¬هایی می باشد، از جمله آن¬ها می¬توان به عدم فرار ژن، فقدان خاموشی ژن و بیان بالای پروتئین و غیره اشاره کرد. آنچه در فناوری ترانسپلاستومیک متفاوت از انتقال ژن به هسته می باشد، نیاز به استفاده از ناقل¬های اختصاصی است، جهت تولید این ناقل ها همسانه سازی قطعات نواحی معین از ژنوم کلروپلاست در حامل های پایه ضروری است. با استفاده از این حامل ها ست که ژن (های) مورد نظر شانس ورود هدفمند به ژنوم پلاستیدی را پیدا می کنند. برای تحقق این هدف با استفاده از نواحی ژنوم پلاستیدی سویا و نقشه فیزیکی ژن¬های مستقر در آن، اقدام به تعیین دو ناحیه اختصاصی برای درج ژن (های) مورد نظر نموده و سپس با استفاده از نرم افزارهای primer blast و oligo 7 برای تکثیر آنها،آغازگر¬های اختصاصی طراحی شد. این نواحی که به نواحی جناحین معروف می ¬باشند، به کمک آغازگرهای اختصاصی و با استفاده از dna ژنومی کل، که به روش ctab جدا شده و از طریق pcr تکثیر یافتند. قطعات تکثیری با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز از نظر طول مورد انتظار تایید و با استفاده از کیت همسانه سازی t/a در پلاسمید خطی ptg19-t همسانه سازی شدند. برای تحقق این هدف باکتری¬های مستعد تهیه شده و با محصول واکنش اتصال که از اتصال قطعه تخلیص شده از ژل به ناقل خطی و در حضور آنزیم dnaلیگاز فاژی حاصل گردیده، مخلوط و برای تراریختی باکتری¬های e.coli سویه ?5dh مورد استفاده قرار گرفتند . نتیجه تراریختی به صورت کلونی¬های سفید در محیط گزینشگر حاوی آمپی سیلین، x-gal و iptg مطالعه گردید و از کلونی¬های سفید مثبت به واکنش کلونی pcr اقدام به کشت مایع و استخراج پلاسمید گردید. پلاسمیدهای استخراج شده پس از بررسی با برش آنزیمی ، برای تعیین توالی به شرکت ژن فناوران ارسال و سپس نتایج حاصل از تعیین توالی جهت تایید صحت کار مورد ارزیابی بیوانفورماتیکی قرار گرفتند، نتایج بررسی¬های بیوانفورماتیکی نشان دادند که توالی مربوط به نواحی همسانه سازی شده، با توالی ثبت شده در پایگاه اطلاعات نوکلئوتیدی ncbi همولوژی قریب به 100% دارد و بنابراین می توان از این قطعات برای ساخت ناقل¬های اختصاصی ترانسپلاستومیک سویا استفاده نمود.